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    標題摘要內容
     自主產品

    自主產品?
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    T7轉錄試劑盒 | GS? T7 Biotin Labeled RNA Synthesis Kit
    來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2021-09-18 | 2001 次瀏覽 | 分享到:

    產品簡介

    本試劑盒利用重組T7 RNA聚合酶,以Biotin-NTP Mix為底物,在體外快速高效合成含生物素標記的RNA。合成的生物素標記RNA可用于RNA Pull-down、Northern Blot、原位雜交等實驗。使用1 μg DNA模板時,每次反應中RNA生成量不低于50 μg。


    產品組分

    組分

    R0402 (3 rxns) *

    T7 RNA Polymerase Mix

    4.75 μL

    T7 Reaction Buffer

    4.75 μL

    Biotin-NTP Mix **

    20 μL

    RNase-Free DNase I (1 U/μL)

    6.3 μL

    10× DNase Reaction Buffer

    30 μL

    RNase-Free Water

    300 μL

    *:使用20 μL體系時,本試劑盒可進行3次轉錄反應。

    **:Biotin-NTP Mix內含ATP, GTP, CTP, UTP和Biotin-16-UTP,其中UTP與Biotin-16-UTP的比例為2:1。


    保存條件

    低溫運輸,-20℃保存,保質期12個月。


    自備材料

    1. RNA純化回收:TRIzol LS Reagent、磁珠或過柱純化試劑盒。

    2. RNA檢測:微量分光光度計、Qubit熒光計、瓊脂糖凝膠電泳設備或Agilent 2100等。

    3. 其他試劑與耗材:RNase-Free或DEPC處理的PCR管和吸頭等。


    操作流程

    1.  DNA模板制備

    使用含有T7啟動子序列的線性化質粒、PCR產物或合成的寡核苷酸為模板,模板應保證高純度高質量,避免RNase、蛋白質、RNA或鹽類污染。

    以線性化質粒為模板的,應使質粒線性化形成平末端或5’突出末端,線性化后應進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,確保線性化切割完全,并純化回收。在20 μL反應體系中,線性化質粒模板可使用0.5~1 μg。

    以PCR產物為模板的,可在引物上加入T7啟動子序列進行PCR擴增,確保T7啟動子序列的方向正確。PCR產物應進行瓊脂糖凝膠電泳檢測,確保條帶單一且大小正確,并純化回收。在20 μL反應體系中,PCR產物模板可使用0.2~0.75 μg。


    2. RNA轉錄合成

    1) 從試劑盒中取出各組分試劑,冰上融化顛倒混勻,短暫離心后置于冰盒上備用。

    2) 按照下表依次添加試劑,配置反應體系。

    表1  RNA轉錄合成的反應體系

    組分

    用量

    RNase-Free Water

    Up to 20 μL

    T7 Reaction Buffer

    1.5 μL

    Biotin-NTP Mix

    6.5 μL

    DNA模板

    X μL

    (線性化質粒0.5~1 μg,PCR產物0.2~0.75 μg)

    T7 RNA Polymerase Mix

    1.5 μL

    3) 顛倒混勻并短暫離心,置于PCR儀上37℃孵育2 h。合成小于300 nt的短鏈RNA時應37℃孵育4~16 h。


    3. DNA模板去除

    向反應液中依次添加68 μL RNase-Free Water,10 μL 10× DNase Reaction Buffer,和2 μL RNase-Free DNase I (1 U/μL),置于PCR儀上37℃孵育15 min。

          

          4.純化回收

      使用TRIzol LS Reagent、磁珠或RNA柱純化試劑盒,純化回收生物素標記的RNA。

          

           5.RNA檢測

    1) 定量檢測

    使用微量分光光度計(如Nanodrop)或Qubit熒光計檢測RNA的濃度和純度。


    2) 電泳檢測

    使用瓊脂糖凝膠電泳或Agilent 2100檢測RNA的大小和完整性,生物素標記的RNA分子量增大,條帶大小可能比預期偏大。使用非變性瓊脂糖凝膠電泳時,可以先將RNA置于65℃孵育10 min,再上樣檢測。



    產品說明書


    吉賽生物T7轉錄試劑盒說明書.pdf


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